ABSTRACT
A malária é uma doença de grande impacto na saúde pública, em diferentes regiões do mundo, inclusive no Brasil. O mosquito anofelino é vetor dos protozoários que causam a doença, constituindo parte fundamental na transmissão. O sistema imune dos mosquitos apresenta função essencial no que determina a competência vetorial desses insetos, sendo, portanto, alvo importante para estudos sobre vacinas de bloqueio de transmissão e de genes para o desenvolvimento de mosquitos transgênicos refratários ao plasmódio. Em Anopheles gambiae, vários genes foram descritos e caracterizados quanto à resposta contra os protozoários causadores da malária. Entre esses genes, o codificador da FBN9 (uma imunolectina da família dos fibrinogênios) e das proteínas da família Tep (Thioester containing protein) apresentaram resultados interessantes que demonstram uma resposta contra Plasmodium spp. e outros microorganismos. No entanto, os estudos sobre a imunidade dos vetores brasileiros, bem como sobre a resposta à infecção por Plasmodium vivax, são escassos. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo estudar os genes FBN9 e Tep1, por meio da amplificação, seqüenciamento, análises das seqüências e da filogenia dos genes e ainda pela quantificação da expressão destes genes em mosquitos infectados com P. vivax.
Os genes correspondentes á FBN9, e de duas proteínas da família Tep (Tep1 e TepX) foram identificados e suas seqüências parciais foram obtidas em Anopheles aquasalis, Anopheles darlingi, Anopheles albitarsis e Anopheles nuneztovari. As análises demonstraram alto grau de conservação destas proteínas entre as diferentes espécies, apresentando grande quantidade de substituições sinônimas, o que sugere que estas proteínas possuem importante função e/ou estrutura. A árvore filogenética gerada para FBN9 mostra que os anofelinos brasileiros e os anofelinos africanos fazem parte de dois agrupamentos distintos. As análises de expressão gênica demonstraram que Tep1 é 4,7 vezes mais expresso em carcaças de mosquitos infectados em relação aos controles e para TepX, apesar de não haver diferença significativa na sua expressão em carcaças de mosquitos infectados em relação ao controle, sua expressão no intestino foi 6,5 vezes maior em mosquitos infectados. Esses resultados demonstram que FBN9 e TepX possuem grandes evidências de serem importantes na resposta imune dos anofelinos brasileiros contra P.vivax. No entanto, outros estudos, como o silenciamento dessas proteínas, são essenciais para afirmações mais conclusivas
Subject(s)
Animals , Male , Female , Guinea Pigs , Mice , Anopheles/immunology , Anopheles/parasitology , Malaria, Vivax/transmission , Plasmodium vivax/parasitologyABSTRACT
A malária é uma doença de grande impacto na saúde pública, em diferentes regiões do mundo, inclusive no Brasil. O mosquito anofelino é vetor dos protozoários que causam a doença, constituindo parte fundamental na transmissão. O sistema imune dos mosquitos apresenta função essencial no que determina a competência vetorial desses insetos, sendo, portanto, alvo importante para estudos sobre vacinas de bloqueio de transmissão e de genes para o desenvolvimento de mosquitos transgênicos refratários ao plasmódio. Em Anopheles gambiae, vários genes foram descritos e caracterizados quanto à resposta contra os protozoários causadores da malária. Entre esses genes, o codificador da FBN9 (uma imunolectina da família dos fibrinogênios) e das proteínas da família Tep (Thioester containing protein) apresentaram resultados interessantes que demonstram uma resposta contra Plasmodium spp. e outros microorganismos. No entanto, os estudos sobre a imunidade dos vetores brasileiros, bem como sobre a resposta à infecção por Plasmodium vivax, são escassos. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo estudar os genes FBN9 e Tep1, por meio da amplificação, seqüenciamento, análises das seqüências e da filogenia dos genes e ainda pela quantificação da expressão destes genes em mosquitos infectados com P. vivax.
Os genes correspondentes á FBN9, e de duas proteínas da família Tep (Tep1 e TepX) foram identificados e suas seqüências parciais foram obtidas em Anopheles aquasalis, Anopheles darlingi, Anopheles albitarsis e Anopheles nuneztovari. As análises demonstraram alto grau de conservação destas proteínas entre as diferentes espécies, apresentando grande quantidade de substituições sinônimas, o que sugere que estas proteínas possuem importante função e/ou estrutura. A árvore filogenética gerada para FBN9 mostra que os anofelinos brasileiros e os anofelinos africanos fazem parte de dois agrupamentos distintos. As análises de expressão gênica demonstraram que Tep1 é 4,7 vezes mais expresso em carcaças de mosquitos infectados em relação aos controles e para TepX, apesar de não haver diferença significativa na sua expressão em carcaças de mosquitos infectados em relação ao controle, sua expressão no intestino foi 6,5 vezes maior em mosquitos infectados. Esses resultados demonstram que FBN9 e TepX possuem grandes evidências de serem importantes na resposta imune dos anofelinos brasileiros contra P.vivax. No entanto, outros estudos, como o silenciamento dessas proteínas, são essenciais para afirmações mais conclusivas
Subject(s)
Male , Female , Animals , Guinea Pigs , Mice , Anopheles/immunology , Anopheles/parasitology , Malaria, Vivax/transmission , Plasmodium vivax/parasitologyABSTRACT
The technique to generate transgenic mosquitoes requires adaptation for each target species because of aspects related to species biology, sensitivity to manipulation and rearing conditions. Here we tested different parameters on the microinjection procedure in order to obtain a transgenic Neotropical mosquito species. By using a transposon-based strategy we were able to successfully transform Aedes fluviatilis (Lutz), which can be used as an avian malaria model. These results demonstrate the usefulness of the piggyBac transposable element as a transformation vector for Neotropical mosquito species and opens up new research frontiers for South American mosquito vectors.